XPD基因多态性与非霍奇金淋巴瘤发病风险

【摘要】 目的 探讨核苷酸剪切修复基因(xpd)单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤(nhl)发病风险的关系。方法 以309例nhl患者和305例健康对照者为研究对象，采用pcrrflp技术检测xpd g23591a、a35931c位点的基因多态。结果 初步分析xpd g23591a和a35931c基因多态性与总的nhl无显著相关。对nhl亚类分析显示，在滤泡性淋巴瘤(fl)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、其他b细胞nhl和t细胞nhl中，xpd 23591位点ga+aa型频率分别为16.3%、18.0%、10.5%、18.4%，对照组为12.5%，or值分别为1.43、1.58、0.89和1.50，差异无统计学意义(p>0.05);xpd35931位点ac+cc型频率分别为15.2%、15.8%、18.4%、12.5%，对照组为11.5%，or值分别为1.41、1.48、1.75和1.12，差异亦无统计学意义(p>0.05)。结论 山东地区汉族人群xpd g23591a、g23591a位点多态性与非霍奇金淋巴瘤发病无关。

　　【关键词】 非霍奇金淋巴瘤;xpd;多态现象;单核苷酸

　　relationship between xpd genetic polymorphism and risk of nonhodgkin's lymphoma

　　liu jie1，zhu jingyan2, song bao1, wang zhehai1, shi yan3 ,lv liyan1

　　1. medical oncology, shandong tumor hospital, ji′nan 250117，china; 2. medical oncology, weifang hospital of traditional chinese medicine;ment of hemotology, qilu hospital,shandong universityabstract：objective to explore the relationship between the single nucleotide polymorphisms of xpd (g23591a、a35931c) and individual susceptibility to nonhodgkin’s lymphoma(nhl).methods xpd g23591a and a35931c genotypes in 309 nhl cases and 305 healthy controls were detected using pcrrestriction fragment length polymorphism s no significant association between the g23591a, a35931c polymorphisms and the risk of whole nhl was shown. nhl cases were subsetted into four groups: follicular lymphoma group, diffuse large bcell lymphoma group, tcell lymphoma group and other bcell lymphoma group. xpd 23591ga+aa frequencies were 16.3%, 18.0%, 10.5% and 18.4% in each group, while 12.5% in controls, the ors were 1.43, 1.58, 0.89 and 1.50, respectively. but no statistically significant difference was shown(p>0.05); xpd 35931ac+cc frequencies were 15.2%, 15.8%, 18.4% and 12.5% in each group, while 11.5% in controls, the ors were 1.41, 1.48, 1.75 and 1.12, respectively. but no statistically significant difference was shown (p>0.05).conclusion the xpd genotypes may do not contribute to the risk of developing nhl in shandong area populations.

　　key words：nonhodgkin lymphomas; xeroderma pigmenting group d (xpd); polymorphism; single nucleotide

　　非霍奇金淋巴瘤是一种常见的血液系统恶性肿瘤，近几年来发病率呈上升趋势。病毒感染、大剂量辐射、接触氯酚、农药、服用免疫抑制剂等是其致病因素[1]，然而机体内在遗传因素也在其发病中起了一定作用。研究表明机体内dna修复酶类可以防御致癌物的侵袭，个体dna修复功能低下者罹患肿瘤危险性增加。xpd是dna修复系统的重要成员，国内外有报道该基因多态与肺癌、皮肤癌等多种肿瘤相关[2, 3]，但有关该基因多态与非霍杰金淋巴瘤(nhl)的研究报道较少。我们以病例对照方法，采用限制性片段长度多态分析，初步探讨山东地区汉族人群xpd基因多态分布及其与nhl患病风险的关系。1 资料和方法

　　1.1 临床资料

　　2002年7月～2005年6月在山东省肿瘤医院、山东大学齐鲁医院住院治疗的nhl患者309例，其中男性173例、女性136例，均为汉族。按照淋巴组织肿瘤who新分类标准(2001)对所有病例进行分类。其中弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)139例，滤泡性淋巴瘤(fl)92例，小淋巴细胞淋巴瘤15例，套淋巴细胞淋巴瘤10例，淋巴浆细胞淋巴瘤11例，周围t细胞淋巴瘤16例，间变性大细胞淋巴瘤12例，其余类型共计14例。对照组305例由同期在上述医院查体中体检健康者组成，与nhl患者的年龄、性别分布差异无统计学意义，均为汉族。所有研究对象均知情同意和自愿参加。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 外周血基因组dna的提取

　　两组均取外周静脉血1ml，edta抗凝，应用omega公司血标本dna提取试剂盒按照操作步骤提取dna。于-20℃冰箱中保存。

　　1.2.2 pcrrflp检测

　　引物参照文献[4]由上海生工合成，xpd g23591a位点的引物为，上游5′ctgttggtgg gtgcccgtatctgttggtct3′，下游5′taatatcggggctcaccctgcagcacttcct3′,产物大小751 bp;xpd a35931c位点的引物为，上游5′gcccgctctggattatacg3′，下游5′ctatcatctcctggccccc3′,产物大小436 bp。pcr条件为94℃ 5 min;95℃ 30 s、60℃ 30 s(xpd g23591a)或61℃ 45 s(xpd g35931a)、72℃ 5 min 35个循环;72℃ 10 min。取5 μl pcr产物加入含5 u限制性内切酶的20 μl酶切反应体系中,37 ℃消化8 h , 3%琼脂糖凝胶电泳检测结果。应用styⅰ酶切g23591a位点，产生507和244 bp 2个片段的为gg型;产生474、244和33 bp 3个片段的为aa型;产生507、474、244和33 bp 4个片段的为ga型。应用pstⅰ酶切a35931c位点，产生290和146 bp 2个片段的为aa型;产生227、146和63 bp 3个片段的为cc型;产生290、227、146和63 bp 4个片段的为ac型。

　　1.2.3 统计学方法

　　分别计算nhl组和对照组xpd基因位点各基因型发生频数，以χ2 检验确定各基因型频率在病例组和对照组间差异的统计学意义。采用比值比(or值)及95%可信区间(95%ci)估计相对危险度。所有统计分析应用spss10.0软件完成。

　　2 结果

　　2.1 xpd基因g23591a、a35931c位点pcrrflp电泳图谱，见图1。

　　2.2 xpd基因型分布与nhl发病风险的关系

　　经检验病例组与对照组人群xpd多态位点的基因型分布频率符合hardyweinberg平衡定律，确定两组样本具有群体代表性。xpd g23591a位点gg、ga、aa基因型频率在对照组与nhl组中分别为87.5%、11.5%、1.0%和83.4%、15.3%、1.3%，ga、aa型者发生nhl的危险度(or值)分别为1.430(95%ci：0.891～2.295)、1.429(95%ci：0.316～6.468),差异无统计学意义(p>0.05)。xpd a35931c位点ac、cc基因型频率在对照组与nhl组中分别为88.5%、10.5%、1.0%和84.5%、13.9%、1.6%。ac、cc型者发生nhl的危险度分别为1.402(95%ci：0.860～2.288)和1.795(95%ci：0.423～7.608),差异无统计学意义(p>0.05)，见表1。表1 xpd 23591,35931位点基因型在病例组与对照组中频率分布

　　*or经性别年龄调整 xpd g23591a:有2例对照和2例病例未扩增出2.3 xpd基因型分布与各种类型nhl发病风险的关系

　　进一步将nhl分为滤泡性淋巴瘤(fl)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、t细胞nhl和其他b细胞类型nhl四大类，在nhl亚组中，xpd 23591位点ga+aa型频率分别为16.3%、18.0%、10.5%、18.4%，对照组为12.5%，ga+aa表2 xpd 23591,35931位点基因型在不同类型nhl组与对照组中频率分布*or值经性别年龄校正型者患各类nhl风险分别约为1.43、1.58、0.89和1.50倍，各病例组与对照组间差异无统计学意义(p>0.05);xpd35931位点ac+cc型频率分别为15.2%、15.8%、18.4%、12.5%,对照组为11.5%，ac+cc基因型者患病风险分别为1.41、1.48、1.75和1.12倍,差异无统计学意义(p>0.05)，见表2。

　　3 讨论

　　xpd位于19号染色体长臂, 编码依赖atp的5′3′dna解旋酶,是ⅱ型转录因子h(tfⅱh)复合体的重要组成部分，参与核苷酸切除修复，并可识别和修复大范围dna损伤，如大的加合物和胸腺嘧啶二聚体等[4]。xpd基因g23591a和a35913c位点基因多态可能导致相应的氨基酸改变，引起个体dna修复能力的差异，并可能在某些肿瘤发病中起一定作用。hu等[2]对3 725名肺癌meta分析显示23591aa和(或)35913cc基因型者肺癌危险性增加;tomescu等[3]报道35913a等位基因者色素瘤发病率增加;邢德印等[5]报道xpd 23591a等位基因型且重度吸烟者罹患肺鳞癌危险性增加, 但并未增加食管癌发病风险。本研究以309例nhl患者和305例健康对照者为研究对象，分析了xpd23591、35913位点基因多态性与nhl发病的关系。初步分析显示xpd基因多态与总的nhl发病无明显相关。nhl是一类高度异质性肿瘤，按照who标准划分为几十种不同亚型，fl和dlbcl分别占30%和45%左右。我们进一步将nhl分为四大亚类：fl组、dlbcl组、其他b细胞nhl组和t细胞nhl组，经分析显示，xpd各基因型分布频率在nhl亚类和对照组之间差异无统计学意义。本研究结果表明xpd基因多态性没有在非霍奇金淋巴瘤癌变过程中发挥作用。

　　本研究还显示山东地区汉族人群中xpd 23591a、35913c等位基因频率分别为6.25%和5.75%，与yu等[6]报道中国人群、park等[7]报道韩国人群研究结果相似，但与欧洲及北美白种人群(约50%)差别较大[3,8]，说明不同地域和人种存在遗传差异。我们推测由于中国人群xpd多态发生率较低，对该基因功能影响较小，因此在非霍奇金淋巴瘤发病中没有起到主导地位。然而，我们不排除其他dna修复基因如xrcc1、xrcc3、xpa、xpc、xpe、xpf等在非霍奇金淋巴瘤发病中起作用。

　　【参考文献】

　　[1] mills pk, yang r, riordan d. lymphohematopoietic cancers in the united farm workers of america (ufw)，19982001[j].cancer causes control, 2005,16(7):823830.

　　[2] hu z, wei q, wang x, et al. dna repair gene xpd polymorphism and lung cancer risk: a metaanalysis[j].lung cancer, 2004, 46(1):110.

　　[3] tomescu d, kavanagh g, ha t, et al. nucleotide excision repair gene xpd polymorphisms and genetic predisposition to melanoma[j].carcinogenesis, 2001,22(3):403408.

　　[4] lunn rm, helzlsouer kj, parshad r,et al. xpd polymorphisms: effects on dna repair proficiency[j].carcinogenesis, 2000,21(4):551555.

　　[5] 邢德印，齐军，谭文，等.北京地区汉族人群dna修复基因xpd单核苷酸多态性与肺癌及食管癌风险的研究[j].中华医学遗传学杂志,2003,20(1):3538.

　　[6] yu hp, wang xl, sun x,et al. polymorphisms in the dna repair gene xpd and susceptibility to esophageal squamous cell carcinoma[j].cancer genet cytogenet, 2004, 154(1):1015.

　　[7] park jy, lee sy, jeon hs, et al. lys751gln polymorphism in the dna repair gene xpd and risk of primary lung cancer[j]. lung cancer, 2002, 36(1):1516.

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