海蓬子总黄酮提取工艺优化研究

作者：顾婕， 杨莉萍， 赵微加， 叶辉　张春银

【摘要】 目的用单因素和正交实验法优选海蓬子中总黄酮的提取工艺。方法采用乙醇提取工艺，对影响黄酮提取得率的主要因素进行分析，用正交实验法确定海蓬子中总黄酮的提取工艺。结果最佳提取工艺条件：乙醇浓度70%，提取时间120min，固液比1∶100(g∶ml)，提取温度80℃。在该条件下，海蓬子总黄酮得率为2.86%。结论该方法是提取海蓬子中总黄酮的有效途径。

【关键词】 海蓬子; 黄酮; 乙醇提取

海蓬子salicornia bigelovii tor属于藜科海蓬子属(又译盐角草属)植物[1]，直接用海水灌溉。海蓬子种子含油量约30%，其中不饱和脂肪酸含量高达90%[2，3]，其嫩尖组织中的微量皂角苷，可中和人体血液中的脂肪酸，降低血管壁上胆固醇，具有降压、降脂、减肥作用。在欧洲，海蓬子被称为“减肥草”[2]。除含有人体必需的氨基酸、微量元素、维生素外，其中的胡萝卜素含量超过普通蔬菜的40倍[4]，可作为绿色有机蔬菜、保健食品、保健油等的原料。栽培海蓬子还有益于改良生态环境，它吸收与利用海水水产养殖池排污物的营养;构建生态湿地，为野生禽类提供食物和栖息地等[5]。wWW.lw881.com海蓬子在我国江苏、辽宁、河北、山东等省都有生长，多见于盐沼地、盐湖旁及海滩。从海蓬子中分离得到槲皮素(quercetin)、槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖苷(quercetin-3-o-β-d-glucoside)、芸香苷(rutin)、异鼠李素-3-o-β-d-葡萄糖苷(isorhamnetol-3-o-β-d-glucoside) 等黄酮类物质[6～8]，但还未见提取工艺研究的报道。为了提高海蓬子中总黄酮提取工艺的 科学 性，进一步研究和开发利用海蓬子，特以总黄酮为考察指标，采用单因素和正交实验法确定最佳的提取条件。黄酮类化合物多采用水、乙醇、丙酮等溶剂提取，总黄酮包括黄酮苷及其苷元，黄酮苷易容易水和乙醇，但苷元的水溶性差，故本研究以乙醇为提取溶剂。

　 　1 材料与仪器

　　新鲜海蓬子由江苏省盐城市绿苑海蓬子开发有限公司提供。全草淋洗沥干后70℃鼓风烘干，粉碎过60目筛，密封于阴暗干燥处保存备用。芦丁(生化试剂)购自 中国 医药集团上海化学试剂公司，95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯。uv-1200紫外可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)、dk-600电热恒温水槽(上海精密实验设备有限公司)、 电子 天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、fz102微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。

　 　2 方法

　　海蓬子总黄酮含量的测定——nano2-al(no3)3比色法[9]。

　　2.1 芦丁标准曲线的绘制[10]用分析天平称取芦丁标准品0.025 0g，用30%的乙醇溶解，定容至100 ml，摇匀，得到0.25mg/ml的芦丁标准溶液，备用。分别准确吸取芦丁标准溶液1.0 ，2.0 ，4.0 ，6.0 ，8.0 ml于25 ml的容量瓶中，用30%乙醇补至约12.5 ml，加入5%亚硝酸钠1.0 ml，摇匀，放置5 min，加入10%硝酸铝溶液1.0 ml，摇匀，放置6 min。加入1.0 mol/l 氢氧化钠溶液5 ml，用30%乙醇定容至刻度，摇匀，放置10 min。用空白液作参比，用紫外可见分光光度计测定510 nm处的吸光度。所得标准曲线为芦丁浓度y和吸光值x的关系，所得回归方程为：y=11.363x-0.034 2，r = 0.999 8。

　　2.2 海蓬子总黄酮的提取及测定称取1.00 g海蓬子粉末于锥形瓶中，按一定的料液比，加入一定浓度溶剂在一定温度下提取一定时间。离心得上清提取液，加入相应的溶剂定容至100 ml。

　　准确吸取定容后的2 ml水提取液或乙醇提取液于25 ml容量瓶中，用30%乙醇补至12.5 ml。加入5%亚硝酸钠1.0 ml，摇匀，放置5 min后加入10%硝酸铝1.0 ml，放置6 min后再加入1 mol/l氢氧化钠5 ml，混匀。用30%乙醇定容至刻度，10 min后以空白液为参比测定510 nm处的吸光度。

　　样品黄酮得率的 计算 公式如下：

　　x(%)=c×v2×25×10-3m×v1×100%

　　x=样品总黄酮得率(%); c=提取液中的总黄酮含量(mg/ml);

　　m=海蓬子样品的质量(g); v1=测定吸光度所用的样液体积(ml);

　　v2=样品定容后的体积(ml)。

　 　3 结果

　　3.1 提取温度对总黄酮得率的影响称取1.00 g样品，加入80ml 70%的乙醇，分别在20，40，60，80，100℃温度下提取60 min，考察提取温度对黄酮得率的影响。结果(图1)表明，温度达到80℃时，黄酮的得率最高。因此最佳提取温度选择为80℃。

　　3.2 提取时间对黄酮得率的影响称取1.00 g样品，加入80 ml 70%的乙醇中，在80℃下提取，考察提取时间对黄酮得率的影响。结果(图2)表明，随着提取时间的延长得率逐渐增加，当乙醇提取时间为180 min时，得率达到最高，随着浸提时间的延长，得率反而下降，因此乙醇提取最佳时间为180 min。

　　3.3 固液比对总黄酮得率的影响称取1.00 g样品，分别加入20，40，60，80，100 ml的70% 乙醇中(固液比分别为1∶20，1∶40，1∶60，1∶80, 1∶100)，分别在80℃下提取60 min，考察固液比对黄酮得率的影响。结果(图3)表明，随着固液比的增加，海蓬子总黄酮的得率逐渐提高。当乙醇的固液比达到1∶80(g∶ml)时，得率出现峰值，再提高固液比，得率趋于平缓，因此最佳提取固液比为1∶80。

　　图3 固液比对黄酮得率的影响 图4 乙醇浓度对黄酮得率的影响

　　3.4 乙醇浓度对黄酮得率的影响称取1.00 g样品，分别加入15%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90% 的乙醇溶液60 ml，80℃浸提60 min，考察乙醇浓度对黄酮得率的影响。由结果(图4)可知，黄酮得率随着乙醇浓度的增大而增加，当浓度达到70%时得率最大;当乙醇浓度继续增加时，得率有较大幅度的下降，故最佳乙醇浓度为70%。

　　3.5 海蓬子中总黄酮提取条件的优化以乙醇浓度(60%，70%，80%)、提取时间(120 ，150，180 min)、固液比(1∶80，1∶90，1∶100)为正交因素，在80℃条件下，海蓬子中总黄酮的得率为指标，设计3因素3水平正交实验。结果见表1。表1 海蓬子黄酮乙醇提取法正交实验结果

　　由表1正交实验结果可见，乙醇浓度对海蓬子总黄酮得率的影响程度最大，提取时间和固液比的影响均不显著，影响程度大小顺序为：乙醇浓度>提取时间>固液比，最佳乙醇提取条件为a2b1c3，即乙醇浓度70%，提取时间120 min，固液比1∶100。

　 　4 结论

　　以乙醇为溶剂提取海蓬子总黄酮，研究了单因素对提取得率的影响，通过正交实验确定了最佳提取工艺条件为：乙醇浓度70%，提取时间120 min，固液比1∶100，此时海蓬子总黄酮的得率是2.86%。乙醇浓度对得率的影响程度最大，提取时间和固液比的影响均不显著。

【 参考 文献 】
　　[1] 洪立洲,丁海荣,杨智青，等.盐生植物海蓬子的研究进展及前景展望[j].江西农业学报　2008,20(7):46.

　　[2] 吕忠进,edwarrd p g.全海水灌溉的作物——北美海蓬子(上)[j].世界农业，2001，2：14.

　　[3] 张爱军，刘发义，沈继红,等.海蓬子种子营养成分分析及制备共轭亚油酸的研究[j].海洋 科学 进展,2003,21(1):89.

　　[4] 张美霞，刘兴宽. 北美海蓬子引种盐城滩涂后生长条件和营养组成比较[j]. 食品科技，2007，32(5)：104.

　　[5] 魏成金，尹金来，徐阳春. 不同氮磷水平对北美海莲子生长和品质的影响[j]. 南京农业大学学报，2006，29(4)：59.

　　[6] park sh, kim ks. isolation and identification of antioxidant flavonoids from salicornia herbacea l[j]. journal of the korean society for applied biological chemistry，2004，47(1)：120.

　　[7] kong cs,kim mm,et oid glycosides isolated from salicornia herbacea inhibit matrix metalloproteinase in ht1080 cell[j]. toxicology in vitro,2008,22(7):1742.

　　[8] min jg, lee ds, kim tj, et al. chemical composition of salicornia herbacea l[j]. journal food science and nurtrition，2002，7：105.

　　[9] 张海悦，王黎兵，郭新力.狭叶荨麻总黄酮的测定[j].食品科技，2007，12：181.

　　[10] 赵文红, 赵 翾, 白卫东,等. 柿叶黄酮化合物提取工艺研究[j].陕西科技大学学报，2007,25(5):54.