以HPLC法测定马来酸氯苯那敏含量的方法中马来酸

【摘要】 目的：探讨在《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》收载品种中采用hplc方法测定马来酸氯苯那敏的含量时，所采集的hplc图谱中，出现的马来酸峰与氯苯那敏峰保留位置如何确定的问题。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱：waters c18 (4.6 mm×150 mm，5μm)，江苏淮阴c18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：庚烷磺酸钠溶液（冰醋酸调ph值至3.3）甲醇乙腈(25∶30∶18)；检测波长262nm。结果：在本文收集的试验条件下所采集的色谱图中，马来酸氯苯那敏对照品均出现了前后两个峰，马来酸峰与氯苯那敏峰保留位置可能在不同的色谱条件下有明显变化。结论：色谱图中马来酸峰与氯苯那敏峰保留位置应加以确定，以防止对马来酸氯苯那敏对照品纯度产生疑虑。

【关键词】 马来酸氯苯那敏；高效液相色谱法；色谱峰定位

马来酸氯苯那敏(2〔对氯ɑ〔2（二甲氨基）乙基〕苯基〕吡啶马来酸盐)，作为抗组胺药物，常被应用于多种复方化学药物制剂处方中。其加入量通常较微量，但其药理药效作用明显，在大多数此类复方药品中是需要定量的成分,一般会采用hplc方法进行含量测定。采用hplc方法对马来酸氯苯那敏进行含量测定，是一种灵敏、专属性较强的可靠的含量测定方法。在《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》的各册中，收载有多个含马来酸氯苯那敏的复方制剂，均为采用hplc方法对来酸氯苯那敏进行含量测定，其采用的hplc方法各不一样。这其中，我们曾对复方氨酚那敏颗粒，氯芬黄敏片及酚氨咖敏片三个品种中的马来酸氯苯那敏的含量测定进行过较大量的试验工作。对这些不同的方法中，出现的色谱图中马来酸峰与氯苯那敏峰保留位置如何确定的问题，进行了一些研究。

1实验部分

《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》第十一册中收载品种氯芬黄敏片，也采用了hplc方法对马来酸氯苯那敏进行含量测定。但此标准方法与复方氨酚那敏颗粒的方法不同，且并未对色谱图中马来酸氯苯那敏的出峰状况进行描述。而在试验中我们发现，虽然此条件下，马来酸峰面积较小，但在多数时候会占到总峰面积的10％左右，在色谱图中有明显的峰的出现。并且，在相同的流动相与检测波长的色谱条件下，采用不同品牌的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，马来酸的出峰情况会明显不同。所以，此方法中，明确马来酸氯苯那敏对照品色谱图中峰的定位，有很重要的意义。

1.1仪器与试药

agilent 1100型高效液相色谱仪（自动进样器），紫外检测器。乙腈，甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。马来酸氯苯那敏对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100047200305 ）；马来酸氨氯地平原料（因无马来酸与氯苯那敏的单体对照品及原料，故采用马来酸氨氯地平原料，以相对比较的办法来为马来酸峰定位）。

1.2方法与结果

色谱条件及溶液的制备色谱柱：waters c18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相：庚烷磺酸钠溶液（庚烷磺酸钠15.2 mg，加三乙胺0.8 ml，加水800 ml，用冰醋酸调ph值至3.3，加水至1000 ml）甲醇乙腈(25∶30∶18)；检测波长262 nm；柱温：40 ℃；马来酸氯苯那敏对照品溶液的制备方法：以流动相溶解为每1 ml中含0.05 mg的溶液。

在上述试验条件下，马来酸氯苯那敏对照品出现前后两个峰，色谱图中氯苯那敏峰（保留时间约为2.4分钟）在前，马来酸峰（保留时间约为3.2分钟）在后（此实验所收集的图谱中，与氯苯那敏峰比较，马来酸峰面积较小）。（图1；图2）

但当上述色谱条件及溶液的制备未作改变，仅因变换色谱柱为江苏淮阴c18(4.6 mm×250 mm，5 μm)后，马来酸氯苯那敏对照品出现前后两个峰，色谱图中马来酸峰（（保留时间约为1.7分钟））在前，氯苯那敏峰（保留时间约为2.9分钟）在后（此实验所收集的图谱中，与氯苯那敏峰比较，马来酸峰面积较小）。

另外，在此方法下，我们还使用过如迪马钻石c18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，岛津ods c18(4.6 mm×150 mm，5 μm)等牌号的色谱柱，也均产生氯苯那敏峰在前，马来酸峰在后的现象。而在使用alltima c18(4.6 mm×250 mm，5 μm)的色谱柱时，则色谱图中马来酸峰在前，氯苯那敏峰在后（此实验所收集的图谱中，与氯苯那敏峰比较，马来酸峰面积较小）。

1.3其他相关实验状况

《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》第三册中收载品种复方氨酚那敏颗粒，其中的马来酸氯苯那敏的含量测定项下要求的色谱条件与系统适用性试验中明确：理论塔板数按氯苯那敏峰计（色谱图中马来酸峰在前，氯苯那敏峰在后）。按本标准的色谱条件及溶液的制备方法进行实验后，发现在此试验条件下（色谱柱：c18；流动相：乙腈0.3%十二烷基硫酸钠溶液磷酸(60∶40∶0.02)；检测波长210 nm；马来酸氯苯那敏对照品溶液的制备方法：以乙腈-0.3%十二烷基硫酸钠溶液（1∶1）溶解为每1ml中含0.06 mg的溶液），马来酸氯苯那敏对照品确实出现了前后两个峰，与标准中明确的色谱图中马来酸峰在前，氯苯那敏峰在后吻合（在此实验所收集的图谱中，与氯苯那敏峰比较，马来酸峰面积较大）。

并且我们也注意到，在《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》第十六册中收载品种酚氨咖敏片，也采用了hplc方法对马来酸氯苯那敏进行含量测定。同样采用了十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，在此标准的流动相与检测波长的色谱条件下，马来酸氯苯那敏的出峰情况为：色谱图中马来酸峰在前，氯苯那敏峰在后。但在此实验所收集的图谱中，与氯苯那敏峰比较，马来酸峰面积较小。

2讨论

实验表明，采用某些国家药品标准中的hplc方法对马来酸氯苯那敏进行定量测定时，由于大部分标准中未能明确指出，在所采集的hplc图谱中，马来酸峰与氯苯那敏峰的保留位置应如何确定，有可能对马来酸氯苯那敏对照品图谱中出现明显非主成分峰难以解释，进而导致对马来酸氯苯那敏对照品纯度的疑虑。

【参考文献】
1 国家药品监督管理局《国家药品标准》（化学药品地方标准上升国家标准第三册），国家药典委员会编，p3-195.

2 国家药品监督管理局《国家药品标准》（化学药品地方标准上升国家标准第十一册），国家药典委员会编，p11-69.