新型甲型H1N1流感检测方法的临床观察

摘　要：目的：研究并探讨新型甲型H1N1流感病毒使用RNA荧光定量来检测的的方法，以及观察使用RNA荧光定量来检测是否具有临床的可行性以及安全性。方法：选取流感患者80例为研究对象。，所有患者都自愿接受调查并服从所有准则，有30例中鼻咽拭子混悬液患者，有28例咽拭子患者，有22例鼻拭子患者，收集的时间以患者去就诊的时间为标准，荧光定量PRC法是用来检测甲型H1N1流感病毒RNA，与此同时对这80例流感患者还要经常做季节性的流感病毒的检测。结果：B型流感病毒患者的人数为45例；其他流感有35例，占44%。根据取材方法来说，鼻咽拭子混悬液的阳性比重是68%，咽拭子所占的阳性比重为47%，鼻拭子所占的阳性比重为39%。结论：在检测新型甲型H1N1流感过程中，所取的材料应尽可能采取鼻拭子混悬液，同时要注意的是：采集样本的时间越早阳性率所占的比重越高。使用RNA荧光定量来检测更具有临床的可行性以及安全性。

关键词：甲型H1N1；流感检测；临床观察
    甲型H₁N₁流感为急性呼吸道传染病，它的病原体是一种先前没见过的病毒，而且重要的是它会在人群中传播。并且与以往或目前的季节性病毒不同，这病毒毒株包含三种病毒的基因片段，它们的名字分别叫猪流感、禽流感、人流感^[1]。人们对甲型流感病毒的免疫很弱，普遍易感，并且甲型H₁N₁流感病毒对人最大的威胁是它可以通过人来传播，危害极大。为了能够使流感的检测手段具有科学行的依据，选取2009年1月～2011年1月收治的流感患者80例为研究对象。观察流感患者在使用RNA荧光定量检测的结果，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1  一般资料：选取我院2009年1月～2011年1月收治的流感患者80例为研究对象。所有患者都自愿接受调查并服从所有准则。男45例，女35例；年龄15～75岁，平均（38.2±8.6）岁；患病时间2.5～20 d，平均（2.5±4.2）d。患者的病症类型如下有30例中鼻咽拭子混悬液患者，有28例咽拭子患者，有22例鼻拭子患者。

1.2  新型甲型H₁N₁流感的检测方法

1.2.1 登记以及采集：医生要每天登记患者的发病的时间，患者发病时候的症状。在采集过程中，必须要尊重患者的意思。对于感冒症状比较严重的患者或者说自己不愿意被采集咽拭子的患者，医生可以采集他们的鼻拭子。鼻拭子的采集一共有22份。如果患者的咽痛比较厉害，那么则需要采集咽拭子，一共采集了28份。对于其他没有特征的患者，医生则采集他们的鼻咽拭子混悬液，一共采集了30份。

1.2.2 对RNA的裂解：在上述的采集样本中选取150 μl的无菌病毒悬浮液，8 μl的助沉剂以及200 μl裂解液。并将150 μl的无菌病毒悬浮液和8 μl的助沉剂以及200 μl裂解液一起加入到无核酸酶的离心管中，深度为1.5 ml。

1.2.3 对RNA的吸附：医生吸取400 μl的已经裂解RNA的混合物，并将这些已经裂解RNA的混合物转移到核酸吸附柱中。核酸吸附柱的转速一般为3 500 r/min。离心过程一般需要2 min。在2 min过后要取下套管，并将套管中的液体倒掉。并将剩余已经裂解RNA的混合物在此转到核酸吸附柱中，再次离心。重复上述过程直到倒掉套管中的液体。

1.2.4 PCR的扩增：这次研究将甲型流感病毒RNA作为模板，将甲型流感病毒RNA的M基因，HA基因以及NP基因三种基因设计成比较特殊的引物和Taqman探针。并将每份样本通过以下方法来检测：①FluA反应液；②SWHl反应液；③SWFluA反应液；④RNP反应液。医生并将这4个结果种进行对比分析并作比较。

2 结果

    我院在2009年1月～2011年1月收治的流感患者80例中，有38例甲型H₁N₁流感病毒RNA阳性患者，占总人数的47.5%；有32例其他流感病毒的患者，占总人数的40%。在38例甲型H₁N₁流感病毒RNA阳性标本中，有3例患者患有合并季节性流感，这种病占甲型H₁N₁流感病毒RNA阳性患者人数的7.2%。

3 讨论

3.1  甲型H₁N₁流感病毒的流行：许多人在感染甲型后的早期症状与普通流感相似，而这些往往容易被人们能所忽视，从而导致其蔓延。尤其是在2009年年初，甲型H₁N₁流感病毒在全球范围内大规模流行。直至2010年，世界卫生组织才宣布甲型H₁N₁流感大流行期结束。由此可以甲型H₁N₁流感持续时间之长，危害及大。

3.2  甲型H₁N₁流感病毒的症状：在早期这种症状与普通感冒很类似，这也是人们一开始不注重它的原因。甲型H₁N₁流感病毒的症状一般包括：①患者出现发热，咳嗽，身体出现疼痛，头痛以及容易感觉到疲劳；②体温异常上升，甚至超过39℃；③患者出现继发性严重肺炎，急性呼吸窘迫综合征，肺出血，肾功能衰竭等症状；④患者出现Reye综合征，呼吸衰竭等；⑤严重者出现休克或者死亡。

3.3  新型甲型H₁N₁流感病毒使用RNA荧光定量来检测的优点：医学界对它的诊断一般有以下几种：①病毒分离；②血清学诊断；③抗原快速检测；④核酸检测。不过病毒分离需要的安全比较的高，医学界一般难以达到，而血清诊断的时间跨度比较的大，难以满足临床的需要。抗原快速检测的敏感性和特异性比较的小。通过上述研究可以发现，核酸检测更具有临床的可行性以及安全性。而且操作的手法比较的简单。

4 参考文献

[1] 郑文亮.新型甲型H₁N₁流感检测方法的临床观察[J].中国临床医学,2011,39(5):44. 本文链接：http://www.qk112.com/lwfw/yxlw/linchuangyixue/96311.html