洗涤式自体血回输中不同温度洗涤液对人红细胞

　 R457.1 B 1673-9701（2014）14-0031-03
　　由于外科手术用血的需求量越来越大，术中自体血液回收是解决血源紧张与防止血源性传染病的重要途径。如何降低自体血液回收过程对红细胞的损伤，是研究的课题之一。目前国内外对于自体血的研究主要集中在自体血在各种手术中的应用以及自体血回输对于患者电解质凝血功能等的影响，对红细胞的功能和保护方面研究很少，洗涤液温度对于红细胞的影响的研究属于空白。本研究寻求更好的回收红细胞的方法，减少自体血回输中对红细胞的损伤，从而达到避免患者在紧急情况下因等待交叉配血时间而贻误抢救时机，同时降低患者因输入库血所带来的风险，也减少患者使用库血所需要花费的高额医疗费用，同时为社会节约宝贵的血液资源。现报道如下。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　选择ASAⅠ或Ⅱ级、无高血压、糖尿病、内分泌疾病的择期手术患者60例，所有患者无血液系统疾病，肝肾功能正常，预计术中出血量≥500mL。所有患者均采用气管插管静吸复合麻醉下进行手术，吸入七氟烷维持麻醉。根据洗涤液温度分为4℃组，24℃组（常温）和37℃组。每组20例。
　　1.2研究方法
　　入选患者采用气管插管静吸复合麻醉，潮气量为（7～8） mL/kg，频率为（12～14）次/min，吸气呼气比1∶2，氧流量1.5 L/min，呼气末EtCO2 35～45 mmHg。吸入七氟烷维持麻醉维持。血压、心率波动幅度<基础值的30%。血液回输机为美国cellsaver自体血回输机，负压设定为150 mmHg，抗凝素为肝素液，125万U肝素加入到500 mL生理盐水中，配成浓度为5万U/L，滴入的速度与回收血液速度为1∶5。离心转速设为5600转/min，探测到血层后，分别采用4℃、24℃和37℃生理盐水进行洗涤，冲洗速度相同，为500 mL/min，洗涤液为回收血液的1.5倍。洗涤液温度采用日立可控恒温箱进行控制。
　　1.3检测项目
　　当首次回收机储血罐内血液达500 mL时，抽取2 mL作为洗液前血液标本，用于待测。血液洗涤后，抽取洗涤后血液10 mL，并保存于相对应温度箱内，分别于洗涤后、洗涤后1h、洗涤后2h、洗涤后4h进行检测。检测项目包括pH值，Na+，K+，血红蛋白（Hb），红细胞压积（Hct）。取洗涤后的红细胞血样，在电子显微镜下观察各组血液中红细胞的形态变化，记录1000个红细胞中变形红细胞的数量。血气分析采用i-STAT血气分析仪进行检测。
　　1.4统计学方法
　　采用SPSS16.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用成组t检验或F检验，计数资料比较采用χ2 检验。P<0.05为差异有统计学意义。
　　2结果
　　2.1洗涤前后血气分析结果比较
　　洗涤后三组Hb、Hct、血钠水平均较洗涤前显著升高（P<0.01），而在随后4h内并没有显著的变化，而24℃组和37℃组Hb、Hct升高幅度不如4℃组（P<0.05）。三组洗涤后血K+浓度较洗涤前显著下降（P<0.01），随后4h内并没有显著变化。三组洗涤前后血pH值没有显著变化（P>0.05）。见表1。
　　2.2不同温度洗涤液洗涤前后红细胞形态变化
　　不同温度洗涤液前后红细胞变形百分比比较见表2。洗涤后三组并没有出现显著红细胞变形，随着时间的延长，三组棘形红细胞均有所增加（P<0.01），而温度越高，随着时间的延长，棘形红细胞比例越高（P<0.01）。
　　3讨论
　　外科手术用血的需求量越来越大，社会用血量猛增和献血量的不足矛盾越来越严峻，术中自体血液回收是解决血源紧张与防止血源性传染病的重要途径，自体血回输的深入研究和临床上科学的应用，不但有利于降低患者医疗成本、降低输血风险，还可以改进医疗质量、提高医疗服务的社会满意度。红细胞作为血液中最多的血细胞，可以反映血液的保存质量。红细胞具有重要的生理功能，正常红细胞的双凹圆盘形状对其发挥正常生理功能具有重要的意义。正常红细胞的形态需要细胞膜以及细胞的蛋白质保持正常的结构，而外界的温度、剪切力等会影响红细胞的蛋白质结构，从而会出现细胞膜功能受损，细胞会出现棘形变。研究显示，红细胞离体后，如果保持稳定的细胞外环境和内环境，红细胞能够存活，并能维持其正常生理功能。红细胞可以离体存活，那么尽量延长其存活时间，对维持血液保存质量具有重要的意义。
　　既往有研究显示，高温会影响红细胞的形态结构，并且温度越高，随着时间的延长，棘形红细胞的比例越高，影响红细胞正常的生理功能。研究显示，随着温度的增加，红细胞会发生热穿孔而导致细胞膜通透性增加，导致热溶血。当温度超过红细胞能够承受的范围时，高温破坏细胞膜的稳定，导致细胞膜骨架组织变化。在本次研究中，随着时间的延长，三组均有不同数量的红细胞发生棘形变，而4℃组棘形红细胞数量最少，其次为24℃组，37℃组最多，说明低温能够尽可能延长红细胞正常形态的维持时间。本次研究均显示，在洗涤后，血红蛋白和红细胞压积均有显著升高，但是4℃组升高更显著，具体机制还不十分明确，但这个现象说明低温洗涤液能够为血液回输提供更好的红细胞功能。红细胞的形态受到温度、所处环境等多种因素的影响。本次研究中所有患者均采用生理盐水作为洗涤液，洗涤后，血钠浓度均显著升高，因此，在4℃环境下，随着时间的延长，红细胞仍然出现了不同程度的棘形变化。有研究比较枸橼酸钠-枸橼酸-葡萄糖-磷酸二氢钠-氯化钠-腺嘌呤-甘露醇（MAP液）替代生理盐水用于自体血回收洗涤液，并与生理盐水比较，显示MAP液能更好地维持红细胞的正常形态。
　综上所述，自体血回输过程中，4℃的洗涤液对红细胞形态的维持优于常温和37℃，尤其随着时间的延长，这些优势更加明显。另外，即使在4℃，采用生理盐水作为洗涤液，随着时间的延长，仍然会出现棘形变，因此在临床中，应尽量缩短血液回输的时间。
　　
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