弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl2、bcl6、CD10蛋白表达

【摘要】 目的 探讨bcl2、bcl6、cd10在弥漫性大b细胞淋巴瘤（diffuse large bcell lymphoma，dlbcl）中的表达及意义。 方法 应用免疫组织化学sp法，检测60例弥漫性大b细胞淋巴瘤标本中bcl2、bcl6、cd10蛋白的表达水平。 结果 bcl2、bcl6、cd10在60例弥漫性大b细胞淋巴瘤中的表达率分别为55.0%(33/60)、48.3%（29/60）、46.7%（28/60），其中cd10（+）/bcl6（+） 15例，25%；cd10（+）/bcl6（-）13例，21.7%； cd10（-）/bcl6（+）14例，23.3%；cd10（-）/bcl6（-）18例，30%。cd10（+）/bcl6（+）与cd10（-）/bcl6（-）中 bcl2的表达差异具有统计学意义。结论 bcl2有望成为dlbcl亚分类的指标。

【关键词】 bcl2；bcl6；cd10；弥漫性大b细胞淋巴瘤 ；免疫组织化学

expression of bcl2，bcl6，cd10 protein and their significance in subgroups of diffuse large bcell lymphoma

chen yu1, zhao tong2,cai qingfa3, wu bingxu1,chen meiyan1

ment of pathology, the 95th military hospital, putian 351100,china;ment of pathology,nanfang medical university;3. department of pathology,affiliated hospital of putian universityabstract：objective to investigate the expression of bcl2，bcl6，cd10 protein and their significance in subgroups of diffuse large bcell lymphoma. methods immunohistochemistry technique (sp method) was used to assess the expression levels of bcl2，bcl6，cd10 protein in 60 cases of diffuse large bcell lymphoma. results expression of bcl2，bcl6 and cd10 protein was found in 33/60(55.0%)，29/60(48.3%)，28/60(46.7%) cases, respectively. the cd10/bcl6 patterns were as follows: cd10（+）/bcl6（+） 15 cases，25%；cd10（+）/bcl6（-）13 cases，21.7%； cd10（-）/bcl6（+）14 cases，23.3%；cd10（-）/bcl6（-）18 cases，30%。ression levels of the bcl2 protein in cd10（+）/bcl6（+） pattern was higher than that in cd10（-）/bcl6（-）pattern (p=0.037).conclusion the bcl2 protein may be of value to distinct subgroups of diffuse large bcell lymphoma.

key words：bcl2；bcl6；cd10；diffuse large bcell lymphoma；immunohistochemistry

弥漫性大b细胞淋巴瘤（diffuse large bcell lymphoma，dlbcl）是成人最常见的、高度恶性的非霍奇金淋巴瘤（nonhodgkin's lymphomas，nhl），约占成人nhl的40%[13]，尽管who将其列为一种独立的疾病类型，但它实际上是一类异质性的淋巴瘤，应用传统的chop（环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松）方案治疗发现仅有一半左右的患者可获得缓解[2]，另一半患者要么治疗无效，要么治疗缓解后复发，最后都导致死亡。对于这一部分的患者，寻找有效的指标来指导治疗是非常重要的。近年来国外一些学者[48]研究发现利用生发中心标志物表达的差异可对dlbcl进行亚分类，另一些学者[912]发现细胞凋亡调控基因在dlbcl分类中也具有重要作用。我们应用免疫组织化学方法检测cd10、bcl6、bcl2在dlbcl中的表达，并对其表达情况及临床意义进行探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

收集本院、莆田学院附属第一医院病理科2003年1月～2006年12月诊断明确病例资料齐全的dlbcl 60例，所有病例均为中性福尔马林固定,常规石蜡切片，he染色。由两位以上从事淋巴瘤研究的专家重新阅读，按照2001年who关于淋巴造血系统肿瘤分类标准重新分类。

1.2 方法

采用石蜡切片链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶连接法（sp）免疫组织化学染色，进行生发中心标志物（cd10、bcl6）、凋亡抑制基因bcl2的检测，所用抗体来源、克隆号、工作浓度见表1。免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。抗原修复液为ph9.0的乙二胺四乙酸（edta），cd20用0.01mol/l的枸橼酸缓冲液（ph6.0）。用pbs代替一抗作阴性对照，以扁桃体组织作阳性对照。dab显色，苏木素衬染。cd10/bcl6作为生发中心样分类的依据。

1.3 结果判定

阳性结果判断标准： cd20、cd10 阳性定位于细胞膜， bcl6阳性定位于细胞核，bcl2阳性主要位于细胞质，以＞20%的肿瘤细胞染色判为阳性。

1.4 统计学方法

采用spss10.0统计分析软件进行χ2检验，p<0.05有差异有统计学意义。

表1 抗体名称、来源及工作浓度

tab 1 immunohistochemical study:

antibodies and conditions of use

antibodyclonesoursedilutioncd20l26maxim1∶20bcl2100/d5maxim1∶1bcl6p1f6neomarker1∶1cd1056c6zymed1∶1

2 结果

2.1 临床及病理结果

60例dlbcl患者，年龄16～91岁，平均年龄52.9岁。男29例，女31例，男女比例为0.94∶1。累及淋巴结27例（45.0%），单纯累及结外33例（55.0%），主要见于胃肠道、中枢神经系统、颌下腺、睾丸等。参照2001年who关于淋巴造血系统肿瘤分类标准，组织学变型主要是中心母细胞性，占86.7%，见表2。表2 60例dlbcl组织学变型

2.2 蛋白的表达

60例dlbcl中，cd20全部阳性， cd10阳性率46.7% (28/60)， bcl6阳性率48.3% (29/60)，bcl2阳性率55.0% (33/60)。bcl6/cd10模式为：cd10（+）/bcl6（+） 15例，25%；cd10（+）/bcl6（-）13例，21.7%； cd10（-）/bcl6（+）14例，23.3%；cd10（-）/bcl6（-）18例，30%。

2.3 cd10/bcl6与bcl2表达的相关性

cd10（+）/bcl6（+）15例中，bcl2（+）3例，阳性率20.0%；cd10（-）/bcl6（-）18例中，bcl2（+）10例，阳性率55.6%。两者的表达差异具有统计学意义（χ2=4.332,p<0.05）。cd10（+）28例中，10例表达bcl2，阳性率57.1%；cd10（-）32例中，17例表达bcl2，阳性率53.1%； 两者bcl2表达差异无统计学意义（χ2=0.097,p>0.05）。bcl6（+）27例中，9例表达bcl2，阳性率33.3%； bcl6（-）33例中，25例表达bcl2，阳性率75.8%；两者bcl2的表达差异有统计学意义（χ2=10.884,p<0.05）。

3 讨论

dlbcl是高度侵袭性、异质性的淋巴瘤，在临床表现、形态学特点、免疫表型和遗传学特征等方面都存在明显差异，但若早期诊断、强力化疗，近半数的患者可获得缓解。以往人们常用国际预后指数（ipi）数值的大小判断预后，但临床应用证明大多数dlbcl的ipi数值为中间值[13，14]，难以判断预后。2000年以来国外采用cdna微阵列技术[47] 研究发现在基因水平上可以将dlbcl分为三种类型：（1）生发中心样（germinal center bcelllike ，gcb）：基因表达特征与正常生发中心b细胞相似；（2）活化b细胞样(activated bcelllike，abc)：基因表达特征与活化的外周血b细胞相似；（3）第3型（type 3）。并且发现gcb的预后明显好于abc和type 3，故将dlbcl简单分为两型：gcb与nongcb ，前者代表预后较好的一型，后者则代表预后较差的一型。但cdna微阵列技术要求新鲜或冰冻标本以提取足够的rna, 所使用芯片的价格比较昂贵，临床上难以推广应用。近年来人们把研究的方向转向蛋白水平的表达上，并发现表达cd10、bcl6的患者预后较好。

cd10，急性淋巴母细胞性白血病共同抗原，为膜相关的中性肽链内切酶；在淋巴细胞的分化过程中，它表达于前b细胞和生发中心b细胞，大约75%的前b淋巴母细胞性白血病及大部分滤泡性淋巴瘤均表达cd10，在基因分析中发现cd10的表达与t(14∶18) 染色体异位有关，因此可以作为生发中心细胞的标志物[15]。本组cd10的阳性率为46.7%（28/60），高于国外的报道[11，16]，可能与本组病例大部分为中心母细胞性有关。

bcl6，锌指蛋白，为一核内转录因子，属于可调节细胞的增殖、分化及器官的发育、形成的锌指蛋白家族。bcl6基因首先在伴有染色体2q27转位的dlbcl中发现，在成熟b细胞的生发中心内表达，但却未见于不成熟的前体细胞或分化好的浆细胞，它在b细胞的分化和生发中心形成中起重要作用。bcl6基因具有控制炎细胞浸润、淋巴因子表达及生发中心形成的生理作用，可作为一转录因子抑制生发中心b淋巴细胞进一步分化成熟而导致nhl的发生[17]，也可作为生发中心细胞的标志物。研究表明cd10和bcl6联合应用能够确定dlbcl的gcb型，是预后好的有效指标[46，15]。本组bcl6阳性率为48.3%（29/60），与文献报道相近。60例dlbcl中，cd10（+）/bcl6（+） 15例(25%)，低于bai m(32%)的报道[18]。cd10（-）/bcl6（-）18例(30%)，与bai m(31%)的报道相近[18]。但cd10（+）/bcl6（-）或cd10（-）/bcl6（+）的病例占38%，对于这一部分的患者，其预后的判断指标仍需进一步探讨。

大量研究表明细胞凋亡受众多基因调控，bcl2基因是细胞凋亡的重要调节基因，它首先在人体内的b淋巴细胞中发现，是一原癌基因，能抑制细胞凋亡。它们在线粒体参与的凋亡途径中起调控作用，能控制线粒体中细胞色素c等凋亡因子的释放。文献[8,13,19]报道bcl2高表达在dlbcl中较为常见（30%～60%），其中20%～30%病例因bcl2基因易位，即t(14;18)导致bcl2高表达，其余病例因bcl2基因扩增而使bcl2过表达。在dlbcl中，bcl2高表达的患者预后明显差[4，14，20]，并与化疗耐药有关[19]。本组bcl2阳性率为55.7%(33/60)，与国外大部分研究结果相近[8,13]。其中cd10（+）/bcl6（+）15例中，bcl2阳性率为20%，bcl6（-）/cd10（-）18例中，bcl2阳性率为55.6%，两者表达差异具有统计学意义，说明表达生发中心标志物的病例bcl2低表达，而生发中心标志物不表达的病例bcl2高表达，提示bcl6/cd10与bcl2联合应用可能成为dlbcl亚分类的指标。

本组cd10（+）与cd10（-）的病例，bcl-2表达的差异无统计学意义，但bcl6（+）与 bcl6（-）的病例bcl2表达的差异具有统计学意义，是否提示bcl6（-）的病例可根据bcl2的表达判断预后，bcl6与bcl2的表达是否有一定的相关性，有待进一步研究。

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