制何首乌提取浓缩及干燥工艺的研究

作者：陈占立 孙爱平 石润波 李知遥 魏学君

【摘要】 目的以制首乌中二苯乙烯苷的含量为考察指标，优选出最佳且适合大生产的工艺条件。方法采用高效液相色谱(hplc)法检测样品中的二苯乙烯苷含量，对提取、浓缩及干燥工艺条件进行比较，使二苯乙烯苷尽可能少地被破坏。结果采用70%的乙醇回流提取3次，第1次10倍量提取2 h，第2次8倍量提取2 h，第3次8倍量提取1 h，在碱性条件真空浓缩后喷雾干燥即可。结论该工艺 科学 、可行、稳定，适合大生产。

【关键词】 制首乌; 二苯乙烯苷; 正交实验; 高效液相色谱

　　abstract:objectiveto optimize the extraction, concentration and dry process of radix polygoni multiflori. methodsthe content of stilbene glucoside was determined by hplc and the best processes of the extraction, concentration and dry were investigated. resultsthe optimal process was to extract 3 times with 70% ethanel:the first 10 times solvent for 2 hours, the second 8 times solvent for 2 hours , was determined third 8 times solvent for 2 hours. the extraction solvent was dried by spraying after vacuum concentration in the alkaline sionthis process is scientific,practical and steady, and suitable for the industrial production.

　　key words:radix polygoni multiflori; stilbene glucoside; orthogonal design; hplc

　　制何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效，制首乌颗粒具有增强免疫功能、抗氧化作用、延缓大脑衰老、提高 dna修复功能、延长寿命、能促进肠蠕动、抑制甘油三酰(tg)及胆固醇在肠道中的吸收 ,从而降低血脂，降低胆固醇 ,改善脂肪代谢等多项功能，其有效成分为二苯乙烯苷类化合物[1]。临床用于血虚萎黄，眩晕耳鸣，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，高血脂等。本实验主要对制首乌的提取、浓缩及干燥工艺进行了筛选。现报道如下。

　 　1 仪器与试药

　　agilent 1100 型高效液相色谱仪。制何首乌药材，购于河北安国市场，经鉴定为蓼科植物何首乌polygonum multiflorum thunb.的干燥块根炮制加工品[2];流动相所用甲醇为色谱纯试剂,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯;二苯乙烯苷对照品：购自 中国 药品生物制品检定所(批号：110844-200404)。

　 　2 方法与结果

　　2.1 二苯乙烯苷含量测定方法

　　2.1.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：c18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(22∶78);柱温30℃，流速1.0 ml/min;检测器为紫外检测器;检测波长320 nm。

　　2.1.2 对照品溶液的制备精密称二苯乙烯苷对照品15.20 mg，置50 ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.304 mg/ml的二苯乙烯苷对照品溶液。

　　2.1.3 供试品溶液的制备取制成的提取样品干膏细粉0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

　　2.1.4 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

　　2.2 提取正交实验结果

　　2.2.1 正交实验因素水平的设计选取对提取影响较大的4个因素进行考察：提取次数(a)，提取时间(b)，加醇量(c)，醇的浓度(d)，以二苯乙烯苷的量为指标进行正交实验，因素水平见表1。

　　表1 水提取因素水平

　　水平a提取次数b提取时间t/hc加醇量/倍d醇的浓度(%)111660221.58703321080

　　2.2.2 实验方法先将制何首乌饮片粉碎取10目与50目之间颗粒，共取9份颗粒各20 g,按正交设计进行实验，合并提取液浓缩加水定容为500 ml，对其检测， 计算 。平行进行两次正交实验。

　　2.2.3 实验结果结果见表2。表2 正交实验结果

　　由直观分析可知：以总二苯乙烯苷为考察指标时，4个因素的影响大小顺序为：提取次数>醇的浓度>提取时间>加醇量。最佳工艺为a3b2c3d2，即用70%乙醇提取3次，2 h/次，每次加10倍量的乙醇提取。

　　2.2.4 方差分析将试验数据进行方差分析，对各因素影响大小的显著性进行了f值检验。结果见表3。

　　分析表明，提取次数、提取时间、加醇量、醇浓度都是重要因素，为缩短生产周期，节约成本，但又不影响二苯乙烯苷的提取，故优选的提取工艺条件定为：a3b(2.2.1)c(3，2，2)d2，即第1次提取2 h，加10倍量70%乙醇，第2次提取2 h，加8倍量70%乙醇，第3次提取1 h，加8倍量70%乙醇。其验证实验结果表明最佳工艺与选定工艺试验结果差别不大，表明优选工艺稳定可行。　表3 方差分析结果

　　2.3 浓缩工艺与结果取制何首乌适量，按确定的工艺进行提取; 分别取醇提水沉液20 kg共4份，其中两份ph值为6.0，在常压下浓缩(50～60℃);另外两份的其中一份调ph值为8.5，采用减压(真空-0.08mpa，50～60℃)浓缩。在浓缩至相对密度约为1.10，1.20和1.30左右时，取样检测总二苯乙烯苷含量，结果得出最佳浓缩条件为碱性条件下减压浓缩。结果见表4。表4 不同浓缩工艺各浓度下二苯乙烯苷含量变化

　　2.4 干燥工艺与结果取制何首乌适量，按确定的工艺进行提取和浓缩;取稠膏40kg平均分成4份，一份放入60℃恒温循环烘干箱中常压干燥，一份放入60℃真空干燥箱中(压力0.65大气压)干燥成干膏，一份采用喷雾干燥(进风温度为145℃)制成喷雾粉，一份采用微波干燥成干膏，分别取干膏粉检测总二苯乙烯苷总含量，结果得出最佳干燥条件为喷雾干燥。结果见表5。表5 不同干燥工艺下二苯乙烯苷含量变化g

　 　3 结论

　　提取过程中提取次数、提取时间、加醇量及醇浓度对总二苯乙烯苷含量明显影响，为缩短生产周期，节约成本，但又不影响二苯乙烯苷的提取，故优选的提取工艺条件定为第1次加10倍量70%乙醇提取2 h，第2次加8倍量70%乙醇提取2 h，第3次加8倍量70%乙醇提取1 h。

　　醇提液在酸性条件下浓缩时二苯乙烯苷含量部分破坏掉，因此在制首乌醇提和浓缩时一定要检测醇提液酸碱性，控制ph值在碱性条件下进行，以减少二苯乙烯苷的破坏。但碱性条件会不会影响其他成分，还有待进一步研究。

　　在浓缩和干燥过程中，受热时间越长总二苯乙烯苷含量明显降低，因此制首乌颗粒在生产过程中，应采用醇提液减压浓缩成膏(d=1.10)再用喷雾干燥方法干燥。

【 参考 文献 】
　　[1] 徐 杰,周文聪,张媛英.何首乌活性成分—二苯乙烯苷的研究进展[j].泰山医学院学报，2008，29(1)：78.

　　[2] 国家药典委员会.