VEGF及HIF-1α在小儿鼻咽部横纹肌肉瘤中的表达及临床意义

　　Affiliated Children's Hospital of Zhengzhou University;

　　

　　Abstract：Objective To investigate the expression and clinical significance of vascular endothelial growth factor(VEGF) and hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α) in nasopharyngeal rhabdomyosarcoma in children.Methods 31 cases of nasopharyngeal rhabdomyosarcoma in children diagnosed by pathology were selected as the research objects, all of them had successfully completed 2 years of follow-up, the relationship between the expression of VEGF and HIF-1α and the clinicopathological characteristics and prognosis of children were analyzed.Results In 31 cases of nasopharyngeal rhabdomyosarcoma in children, the positive rate of VEGF expression was 71.0%(22/31),and the positive rate of HIF-1α expression was 67.7%(21/31).There was no statistically significant difference in pathological type and degree of differentiation between children with positive and negative VEGF expression(P>0.05),and there was statistically significant difference in clinical stage and lymph node metastasis(P<0.05);There was no statistically significant difference in pathological type and degree of differentiation between children with positive and negative HIF-1αexpression(P>0.05),and there was statistically significant difference in clinical stage and lymph node metastasis(P<0.05).The expression of VEGF and HIF-1α was positively correlated(P<0.05).The survival rates of 1 and 2 year followed-up in children with positive VEGF and HIF-1α expression were slightly lower than those with negative expression, but the differences were not statistically significant(P>0.05).Conclusion The positive rates of VEGF and HIF-1α expression in nasopharyngeal rhabdomyosarcoma in children are both high, they are closely related to clinical stage and lymph node metastasis, and the expressions of VEGF and HIF-1α are positively correlated and have a high consistency, they have certain clinical significance for the diagnosis, treatment and prognosis of children with rhabdomyosarcoma in nasopharynx.

　　

　　Keyword：Rhabdomyosarcoma; Nasopharynx; Children; Vascular endothelial growth factor; Hypoxia-inducible factor-1α;

　　

　　小儿横纹肌肉瘤是多见的儿童恶性软组织肉瘤，可发生于头颅、四肢、躯干、泌尿生殖系等多部位，以肿物为主，因发病部位不同产生的压迫症状和邻近器官的侵犯症状而有所不同[1-2]。临床数据显示头颈部为多发部位，占到45%左右[3]。该疾病瘤体生长迅速，早期发现诊断困难、就诊时多处于临床Ⅱ期以上、瘤体复发率高等[4]。据报道近年来小儿横纹肌肉瘤发病率呈逐年上升趋势，尽管目前化疗、放疗与手术措施不断完善，使得患儿的生存率有了显著提高，但其预后受到病理类型和分期等多种因素影响，仍不甚满意，是临床研究的难点和重点问题[4-6]。本研究注意收集院内相关病例资料，观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在小儿鼻咽部横纹肌肉瘤中的表达及临床意义，以期为诊治工作提供参考依据，总结报告如下。

　　

　　1 材料与方法

　　

　　1.1 一般资料

　　

　　选取我院2017年4月至2018年3月诊治并且病理学确诊的小儿鼻咽部横纹肌肉瘤31例作为研究对象，纳入标准：①年龄1～12岁；②临床资料及病理学结果完整；③家长知情同意研究内容并配合完成随访工作。排除标准：①呼吸系统严重疾病患儿；②其他恶性肿瘤患儿；③其他疾病累及鼻咽部的患儿。本研究内容符合医学伦理学要求。患儿年龄1岁9个月～11岁5个月，平均(5.9±1.6)岁；病理类型：胚胎型25例，腺泡型6例；中低分化20 例；高分化11例；I、Ⅱ期 17例，Ⅲ、Ⅳ期14例；无淋巴结转移16例，淋巴结转移 15 例。

　　

　　1.2 方法

　　

　　所有患儿的组织标本均采用免疫组化法检测VEGF及HIF-1α表达情况，取材后石蜡包埋进行4 μm 连续切片，置于载玻片后75 ℃烤片，切片脱蜡，经3%过氧化物内源性过氧化酶消除、免疫组化抗原修复缓冲液修复，室温下加入山羊血清封闭，加入一抗4 ℃过夜、磷酸缓冲液冲洗、加入二抗温育30 min, 冲洗后二氨基联苯胺显色液显色，苏木精对比染色，封片，采用双盲法让两位5年以上工作经验的病理科医师进行显微镜下观察，Hela细胞阳性对照，磷酸盐缓冲液替代一抗阴性对照。

　　

　　1.3 判断标准

　　

　　每张切片均在400倍镜显微精视野下随机选取5个视野，染色强度方面无着色0分、弱着色(淡黄色)1分、中等着色(棕黄色)2分、强着色(黄褐色)3分，每个视野计数100个细胞，阳性细胞百分率≤5% 0分、6%～25% 1分、26%～50% 2分、>50% 3分，染色强度和细胞计数分数相加后进行免疫组化结果判定，0分(-)、1～2分为(+),3～4分为(++),5～6分为(+++)。

　　

　　1.4 统计学方法

　　

　　应用SPSS 20.0统计分析软件进行数据处理，计数资料以[n(%)]表示、进行χ2检验，VEGF及HIF-1α的表达相关性采用Spearman等级相关分析，以P<0.05作为有统计学意义。

　　

　　2 结果

　　

　　2.1 VEGF及HIF-1α表达阳性率分析

　　

　　31例小儿鼻咽部横纹肌肉瘤中，VEGF表达阳性率为71.0%(22/31)、HIF-1α表达阳性率为67.7%(21/31),VEGF及HIF-1α表达阳性具有较高的一致性，见表1。

　　

　　表1 本组患儿VEGF及HIF-1α表达阳性率比较(例，%)

　　

　　2.2 VEGF及HIF-1α在不同临床病理特征的患儿中表达情况分析

　　

　　VEGF表达阳性与表达阴性的患儿病理类型、分化程度差异无统计学意义(P>0.05),临床分期、淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05),具体数据见表2;HIF-1α表达阳性与表达阴性的患儿病理类型、分化程度差异无统计学意义(P>0.05),临床分期、淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05),具体数据见表3。

　　

　　表2 VEGF在不同临床病理特征的患儿中表达情况分析(例，%)

　　

　　表3 HIF-1α在不同临床病理特征的患儿中表达情况分析(例，%)

　　

　　2.3 相关性分析

　　

　　31例小儿鼻咽部横纹肌肉瘤标本中，VEGF及HIF-1α表达结果对比具体数据见表4,VEGF及HIF-1α的表达呈正相关(γ=0.693,P<0.05)。

　　

　　表4 本组患儿组织标本的VEGF及HIF-1α表达对比/例

　　

　　2.4 随访生存率分析

　　

　　VEGF及HIF-1α表达阳性的患儿1、2年随访生存率均略低于表达阴性组，但差异无统计学意义(P>0.05),具体数据见表5。

　　

　　表5 VEGF及HIF-1α表达阳性的患儿生存率分析(例，%)

　　

　　3 讨论

　　

　　小儿横纹肌肉瘤起源于原始间叶组织，鼻咽部肿瘤可引起声音改变、气道梗阻、窒息和鼻出血，鼻旁窦肿瘤有疼痛、鼻腔分泌物增多、鼻出血症状，如有扩散转移可出现发热、厌食、体重下降、疼痛和衰弱等情况，因症状缺乏特异性，易造成误诊误治，需借助临床病理学、免疫组织化学等方法诊断[7-8]。

　　

　　横纹肌肉瘤根据组织学和遗传学特点可分为胚胎型、腺泡型、成人多形型，小儿横纹肌肉瘤以胚胎型居多，本研究中小儿鼻咽部横纹肌肉瘤病理确诊胚胎型25例，腺泡型6例。中低分化20 例，高分化11例，有研究表明根据分化程度进行分层和综合治疗，可以不断优化化疗方案，进一步改善预后，提高疗效[9]。临床分期反映肿瘤局部浸润程度和转移情况，有利于治疗方案的选择和预后的判断，Ⅰ、Ⅱ期肿瘤局限，肉眼观完全切除，Ⅲ期肿瘤未完全切除或仅活检取样，肉眼有残留肿瘤，Ⅳ期诊断时已有远处转移，研究中I、Ⅱ期 17例，Ⅲ、Ⅳ期14例。无淋巴结转移患者 16例，淋巴结转移 15 例，横纹肌肉瘤因无完整薄膜容易通过血流、淋巴管转移，可以发生局部、区域及远处转移，有研究表明该疾病总体生存率偏低与淋巴结转移存在关联[10-11]。

　　

　　研究结果显示本组小儿鼻咽部横纹肌肉瘤中VEGF、HIF-1α表达阳性率分别为71.0%、67.7%,并且表达阳性与表达阴性的患儿的临床分期、淋巴结转移差异有统计学意义，这与之前童刚领等[12]提出的“小儿鼻咽部横纹肌肉瘤组织中存在HIF-1a蛋白和VEGF蛋白的高表达，且与肿瘤分期有关”相一致。VEGF是1种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，在体内诱导血管新生、促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等[13-14]。有研究证实HIF-1a是机体应答缺氧应激的关键因子，能够与上下游多种蛋白组成不同的信号通路，介导低氧信号，调控细胞产生一系列对缺氧的代偿反应，其可引起多种基因转录，使肿瘤细胞耐受低氧环境，是肿瘤细胞生长过程中重要的调控因子[15-17]。以上内容提示VEGF、HIF-1α在肿瘤的发展、转移中发挥着重要作用，其表达情况与肿瘤增殖、侵袭和转移、新生血管生成等密切相关，因此VEGF、HIF-1α不同表达情况的小儿鼻咽部横纹肌肉瘤临床分期、淋巴结转移存在显著差异。

　　

　　研究结果还提示小儿鼻咽部横纹肌肉瘤组织中VEGF及HIF-1α的表达呈正相关，考虑是在低氧环境下HIF-1α这一缺氧诱导因子水平升高，HIF-1α在多种肿瘤VEGF信号通路中起着枢纽作用，能够增加VEGF转录活性，促进肿瘤新生血管形成、浸润、转移[18]。低氧环境下VEGF与内皮细胞膜上VEGF受体结合，自身磷酸化激活有丝分裂原活化蛋白激酶，诱导内皮细胞增生，并且低氧促使VEGF提高血浆酶原活化因子活性，促进细胞外蛋白水解[19]。可见小儿鼻咽部横纹肌肉瘤组织中VEGF及HIF-1α的表达具有高度一致性，在肿瘤细胞发生和转移中共同发挥作用，密切相关。

　　

　　本组患儿均维持了较好的随访工作， 根据随访数据发现VEGF及HIF-1α表达阳性的患儿1、2年随访生存率均略低于表达阴性组，这与以往的报道结果并不一致，如童刚领[20]曾提示VEGF及HIF-1α表达阳性的患儿3年总生存率和无疾病进展生存率均显著低于阳性组。VEGF及HIF-1α表达与肿瘤增殖、侵袭和转移、新生血管生成等密切相关，说明其表达阳性率一定程度上反映疾病的进展情况，提示疾病严重程度、预测治疗预后，但是本研究数据并未体现出统计学意义，考虑与研究样本少、个体差异或跟踪随访时间仅有2年有关，有待积累病例资料深入研究VEGF及HIF-1α表达对于预后的预测作用。

　　

　　综上所述可见，小儿鼻咽部横纹肌肉瘤中VEGF及HIF-1α表达阳性率均较高，与临床分期、淋巴结转移密切相关，并且VEGF及HIF-1α两者的表达呈正相关，具有较高的一致性，对小儿鼻咽部横纹肌肉瘤患儿的诊治、预后判断有一定的临床意义。

　　

　　参考文献

　　

　　[1] 王娴静，Chi Lin.儿童横纹肌肉瘤诊疗研究新进展[J].中国小儿血液与肿瘤杂志，2018,23(3):164-168.

　　

　　[2] 赵倩，金眉，张大伟，等.儿童躯干及四肢横纹肌肉瘤临床特点及预后因素的相关分析[J].中国小儿血液与肿瘤杂志，2018,23(3):127-131.

　　

　　[3] 杨珍芳.小儿软组织肉瘤病理分析[J].临床医药文献电子杂志，2018,5(39):123,131.

　　

　　[4] 崔西春.小儿横纹肌肉瘤血清蛋白质标记物的筛选及临床应用研究[D].郑州大学，2016.

　　

　　[5] 徐艳丽.儿童横纹肌肉瘤预后因素分析[J].中国小儿血液与肿瘤杂志，2017,22(5):272-276.

　　

　　[6] 张谊，张伟令，黄东生，等.高危头颈部横纹肌肉瘤临床特征及预后分析[J].中华实用儿科临床杂志，2020,35(3):193-196.

　　

　　[7] 张梅红，王建国，乔振花.小儿鼻腔鼻窦胚胎性横纹肌肉瘤1例[J].河北医药，2016,38(2):319-320.

　　

　　[8] 黄海建，李晓欧，钟定荣.鼻腔鼻窦横纹肌肉瘤15例临床病理学特征[J].中华病理学杂志，2019,48(11):884-886.

　　

　　[9] 中国抗癌协会小儿肿瘤专业委员会，中华医学会儿科学分会血液学组，中华医学会小儿外科学分会肿瘤组.中国儿童及青少年横纹肌肉瘤诊疗建议(CCCG-RMS-2016)[J].中华儿科杂志，2017,55(10):724-728.

　　

　　[10] 王琴中，张百红.阿帕替尼联合替吉奥治疗晚期胚胎性横纹肌肉瘤1例[J].临床肿瘤学杂志，2018,23(9):863-864.

　　

　　[11] 王文佳，叶树凤，庄晓婷，等.儿童耳横纹肌肉瘤伴颞骨侵犯1例并文献复习[J].中国实验诊断学，2019,23(1):41-42.

　　

　　[12] 童刚领，孙晓非，袁中玉，等.HIF-1α和VEGF在横纹肌肉瘤的表达及临床意义[C].全国儿童肿瘤学术会议.2009.

　　

　　[13] Okamoto M,Watanabe M,Inoue N,et al.Gene polymorphisms of VEGF and VEGFR2 are associated with the severity of Hashimoto's disease and the intractability of Graves' disease,respectively[J].Endocrine J,2020,67(5):545-559.

　　

　　[14] Abbink K,Zusterzeel PLM,Geurts-Moespot A,et al.Prognostic significance of VEGF and components of the plasminogen activator system in endometrial cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol,2020,146(7):1725-1735.

　　

　　[15] 郭树鹏，杨柳，张莉琳，等.HIF-1α信号通路在肿瘤细胞调控中的研究进展[J].现代生物医学进展，2015,15(16):3145-3148.

　　

　　[16] Zhao C,Chen J,Cheng L,et al.Deficiency of HIF-1α enhances influenza A virus replication by promoting autophagy in alveolar type II epithelial cells[J].Emerg Microbes Infect,2020,9(1):691-706.

　　

　　[17] Monika S,Iga J,Jakkapong K,et al.Various forms of HIF-1α protein characterize the clear cell renal cell carcinoma cell lines[J].IUBMB life,2020,72(6):1220-1232.

　　

　　[18] 向元俤，张碧波，吴娟，等.鼻咽癌组织中乏氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子的表达及其临床意义[J].中国耳鼻咽喉颅底外科杂志，2016,22(4):279-283.

　　

　　[19] Zhao L,Wang J,Zhang Y,et al.Vitamin C decreases VEGF expression levels via hypoxia inducible factor 1α dependent and independent pathways in lens epithelial cells[J].Mol Med Rep,2020,22(1):436-444.

　　

　　[20] 童刚领.p-mTOR/p-4EBP1/HIF-1α/VEGF在横纹肌肉瘤组织中的表达及其临床意义[D].中山大学，2009.

本文链接：http://www.qk112.com/lwfw/yxlw/qitayixue/127070.html