双柏凝胶剂中大黄素体外透皮吸收的实验研究

作者：梁学政，奉建芳，陈惠红，吴昭璇

【摘要】 目的研究双柏凝胶剂中主要成分大黄素的透皮吸收特性，并考察了处方中其他成分对大黄素吸收的影响作用。方法采用改良的franz扩散装置，以离体鼠皮为屏障、ph7.4磷酸盐缓冲液为接受介质，研究了大黄提取物凝胶及双柏凝胶剂中大黄素透皮吸收性能。结果在大黄提取物和双柏凝胶剂中，大黄素12 h累积透皮释药为10.03，37.06 μg·cm-1。结论大黄提取物凝胶中大黄素具有一定的透皮吸收，但不太理想，而双柏凝胶剂由于其他组分的加入，促进了大黄素的吸收，从一个方面佐证了该处方制成凝胶剂的可行性。

【关键词】 双柏凝胶剂； 大黄素； 透皮吸收

双柏散由大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、薄荷组成，具有消肿止痛，活血化瘀之功效，主要用于治疗跌打损伤早期及疮疡初起红肿热痛等症［1］。传统的蜜调散剂使用时易污染衣物，且存在较多的过敏反应。为方便使用，同时为提高药物的生物利用度，我们将其制成双柏凝胶剂。本文以大黄提取物凝胶作对比，以大黄素为指标，考察了双柏凝胶剂透皮吸收情况，从而对双柏凝胶剂的体外吸收进行初步评价。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器高效液相色谱仪（日本岛津）：lc-10atvp双泵，slc-10avp控制器，spd-10avp紫外检测器，cto-10asvp柱温箱。
1.2 试药大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为0756-9908)；甲醇为色谱纯;大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、薄荷由柳州市神农中药饮片厂提供，经柳州市中医院药检室鉴定，符合《中国药典》要求；其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 凝胶剂的制备取处方量的大黄(a)和根据双柏散处方比例称取药材粗粉(b)，均加95%乙醇浸泡6 h，以5～7 ml/min的速度渗漉提取，相应渗漉液浓缩至约50 g，加入3 g 卡波姆940，密闭放置过夜使其充分溶胀，加蒸馏水至100 g，研匀即得。分装于密闭避光的容器中，贮存于凉处。a：大黄凝胶;b:双柏凝胶

　　2.2 建立测定方法

　　2.2.1 色谱条件

　　色谱柱为选kromasil- c18 柱(5μm，250 mm×4.6 mm)；流动相为甲醇-水（6:4）；流速1.0 ml/min；检测波长254 nm；柱温30℃；进样量：10 μl。

　　2.2.2 对照品溶液制备

　　精密称取大黄素对照品5 mg，加甲醇溶解定容至25 ml，制成0.2 mg/ml的溶液，即可。

　　2.2.3 供试品溶液制备

　　精密称取凝胶剂1 g，水浴浓缩至近干，加蒸馏水10 ml，浓盐酸1 ml，沸水浴中水解30 min，再加氯仿20 ml，超声振荡20 min，置分液漏斗中分层，取氯仿层；水层用氯仿洗3次，每次10 ml，合并氯仿液，挥干。加适量甲醇溶解，转移至10 ml容量瓶中，超声振荡数分钟使溶解完全，加甲醇至刻度，摇匀。针孔式微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.2.4 线性关系

　　考察精密吸取对照品溶液用流动相稀释成0.4，1.0，2.0，4.0，10.0 μg·ml-1进样10 μl测定，以大黄素进样量（y）和峰面积（x）进行线性回归，求得标准曲线的回归方程为：y=3 300.3x-1 422，r=0.999 8。结果表明大黄素进样量在0.4～10 μg·ml-1范围内有良好的线性关系。

　　2.2.5 精密度实验

　　精密吸取上述对照品溶液10 μl，重复进样测定5次，结果大黄素峰面积值的rsd=0.59%，表明仪器精密度良好。

　　2.2.6 稳定性实验

　　取供试品溶液，于0，1，2，3 h分别进样测定峰面积，结果rsd=0.42%。表明供试品在3 h内稳定。

　　2.3 体外透皮吸收方法

　　2.3.1 离体鼠皮的制备

　　取体质量20～22 g小鼠 ，乙醚麻醉，剪去背部毛，取皮肤剥离皮下脂肪及粘液组织,用生理盐水冲洗干净，备用。

　　2.3.2 接受液ph 7.4的磷酸盐缓冲液。

　　2.3.3 体外透皮实验装置及方法

　　本实验采用 franz扩散池装置。将备用鼠皮固定在扩散池的供应室与接受室之间，使角质层面向供应室，上下夹紧后在接受室中注满接受液，驱除气泡。在供应室中分别加入1 g样品凝胶(a )及( b)。开启电磁搅拌器连续搅拌,并保持水浴温度在( 32 ±0. 5 )℃。分别在 0.5，1，2，4，6，8，12 h取样4 ml，同时补加等量同温的新鲜接受液。

　　2.3.4 接受液含量测定

　　和累积透皮量的计算取接受液4 ml供试品溶液制备项下操作得到供试品溶液。取10 μl进样，在 254 nm处测得峰面积，代入标准曲线方程,得接受液浓度，并按以下公式计算累积释药量

　　（q）:c1=f(xi)；q=(ci×v∑n-1i=1+ci×4)/s。其中 f(xi):标准曲线方程；ci:接受液中药物浓度 ；v:接受液体积 ；s :扩散面积。

　　2.4 体外透皮吸收结果色谱分离结果见图1。

结果以累积透皮释药量q对释药时间t作图 （见图2）。将数据进行模型拟合，渗透动力学符合higuchi函数方程，即a凝胶：q=2.751t1/2+0.704(r=0.995 3)，渗透速率为2.386 μg·h-1，而b凝胶：q=7.615t1/2+10.542(r=0.986 7)，渗透速率为7.619 μg·h-1。

　　经处方配伍后，大黄中主要成分大黄素的经皮渗透效果优于其单一药物大黄制成的凝胶剂。

　　3 讨论

实验全部选择雄性昆明小鼠可便于取皮操作及结果数据的平行。同时以高效液相色谱法为离体鼠建立了可靠的体外测定方法，在渗透实验中，由于皮肤与介质长时间接触，皮肤中蛋白质等物质易脱落，溶解，会导致混浊或呈乳光，本文酸化样液以游离出脂溶性大黄素，然后氯仿提取，从而消除了皮肤中蛋白等成分对色谱柱的影响。

体外透皮实验中水浴设定的温度为（32±0.5）℃系最接近正常人体表皮的温度。实验中的接受液ph设定在7.4也是因其接近人体皮肤的ph值。

本实验中结果显示，由于处方中含有泽兰、侧柏叶、薄荷等其他成分，使双柏凝胶剂中大黄素的渗透作用提高，从此角度可以看出双柏凝胶剂用于局部具有一定透皮作用。但究竟是处方中的何种成分提高了大黄素的透皮吸收，由于时间及经费等方面的原因还有待于进一步的研究。

【参考文献】
［1］岑泽波，吴诚德.中医伤科学［m］.上海:上海科学技术出版社,1985:243.

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