关于中药知母过氧化物的同工酶谱分析

　　提要　为探讨知母种内变异的遗传特征，对种植在同一环境条件下的知母的过氧化物同工酶谱进行了分析。知母的过氧化物同工酶谱在种内存在明显变异，可分为三种类型，分别以天津蓟县、内蒙古赤峰、山东平度产知母为代表。为知母形态的种内变异提供了生物化学方面的依据。

　　关键词　知母;　过氧化物同工酶谱;

　　分类号：R282.71　　文献标识码：A　　文章编号：1008-0805(2000)06-0486-01

　　The Peroxidase Zymogram Analysis of Anemarrhena asphodeloides Bunge CHEN Wan-sheng, QIAO Chuan-zhuo (College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)

　　Abstract　The peroxidase zymograms of Anemarrhena asphodeloides Bunge were analyzed. It was found that zymograms of samples, which were collected from cultivated herbs previously growing in different locates, varied greatly. According to the difference of zymogram, these herbs should be separated into three biotypes, respectively represented by ones growing in Ji Xian of Tianjin, Pingdu of Shandong and Chifeng of Inner-mongolia.

　　Key words　Anemarrhena asphodelodies Bunge;　Peroxidase zymogram

　　知母Anemarrhena asphodeloides Bunge 广泛分布于我国黄河以北地区，朝鲜、蒙古也有分布，根茎入药，日本栽培之为观赏植物。《中国植物志》[1]对其形态作了较详细的记载。本属虽仅有一种，但国内文献对其形态描述不尽相同。《中药志》明确记载“全株无毛”，而《中国植物志》《中国高等植物图鉴》[2]《内蒙古植物志》[3]等未明确记载这一特征，对花的颜色、花葶长度等的描述也不尽一致。

　　我们对知母各主要产区所产的知母进行了实地考查，并将有代表地区所产知母移栽于本校药圃中，进一步考察其生长形态、组织形态等特征，结合参阅国内各地标本馆所藏的腊叶标本，考察了各地知母的形态种内变异。研究发现各地知母植株形态、叶表面超微结构皆存在差异，以山东平度、天津蓟县、内蒙古赤峰三分布区差异较为显著，揭示我们知母在种的进化过程中，在生长环境等多种因素的长期作用下，形态特征已发生分化。通过异地栽培后观察，有一些特征固化，如叶下表面毛茸的长度、上表面角质层二级纹理等，成为可遗传的形态特征。为探讨知母种内变异的遗传特征，我们对种植在同一环境条件下的知母的过氧化物同工酶谱进行了分析。

　　1　材料与方法

　　1.1　样品液制备：取移栽于本校药圃5 a后的各地知母新生根茎最前端的1.0 cm段，鲜重0.4 g。于低温冰箱中固定1 h，加电极缓冲液(含20%蔗糖)4.0 ml。在冰浴中研磨成匀浆状，-10℃条件下8 000 r/min离心25 min，取上清液供电泳分析用，24 h内使用。材料原产地见图1。采集日期为1999-07-12。

　　1.2　试剂配制(所用水为去离子水)

　　1.2.1　A液：1 mol/L HCl 48 ml，四甲基乙二胺0.24 ml，加水至100 ml。

　　1.2.2　C液：丙烯酰胺30 g，甲叉双丙烯酰胺0.8 g，加水溶解至100 ml。

　　1.2.3　G液：过硫酸铵0.14 g，加水溶解至100 ml(新配)，用时稀释10倍。

　　1.3　实验方法：采用垂直板电泳法，连续凝胶系统，按文献法配制凝胶液，A∶C∶G∶水为1∶2∶4∶1 (V/V)，制备凝胶;每样品槽加入样品液60 μl，在上槽电极液中加入溴酚蓝指示剂数滴，保持电压300 V，电流35 mA，当指示染料迁移至下端时，停止电泳，剥胶，采用抗坏血酸-联苯胺染色液染色，显示过氧化物同工酶谱带，最后谱带呈褐色，拍照。

　　图1　知母的过氧化物同工酶谱

　　A 山东平度　B 天津蓟县　C 内蒙古赤峰

　　D 山西稷山　E 甘肃西峰　F 陕西吴旗

　　2　结果与讨论

　　6个产地知母电泳谱带见图1。过氧化物同工酶谱带按迁移率可分为a，b，c，d 4段带区，迁移率分别为0.552～0.495，0.352～0.286，0.248，0.114～0.095。其中由于d段迁移率最小，且不甚稳定，故不予分析。根据a，b，c三段谱带区形态，结果表明，知母的过氧化物同工酶谱在种内存在明显变异，可分为三种类型：天津蓟县产知母具a，b，c三段谱带区。其中c区火箭形，是其特有谱带，为类型Ⅰ;赤峰、山西、甘肃、陕西4产地知母具a，b两段谱区，且明显，为类型Ⅱ;山东知母仅b段谱区明显，a段显色极其微弱，几不可见，为类型Ⅲ。本文为知母形态的种内变异提供了生物化学方面的依据。

　　作者简介：陈万生(1968-)，男(汉族)，安徽省当涂县人，现任第二军医大学药学院讲师，博士学位，主要从事中药的品质评价及新药研究.

　　陈万生(中国人民解放军第二军医大学药学院，上海　200433)

　　乔传卓(中国人民解放军第二军医大学药学院，上海　200433)

　　参考文献：

　　[1]　中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志14卷[M].北京：科学出版社，1980∶40

　　[2]　中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(5)[M].北京：科学出版社 ，1976∶434

　　[3]　内蒙古植物志编写组.内蒙古植物志(8)[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，1985∶166

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