抗癫痫药物皮肤不良反应与HLA—B*1502基因的发展

【摘要】 目的：探讨江西省汉族人群中芳香族抗癫痫药物所致皮肤不良反应与HLA-B*1502基因的相关性。方法：采用病例对照研究，一共收集样本46例，其中Stevens-Johnson综合征（SJS）组13例，轻微皮肤反应（MPE）组19例，对照组（包括耐受者和正常志愿者）14例。采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP-PCR）技术检测HLA-B*1502的基因型。采用Fisher确切概率法检验分析HLA-B*1502与抗癫痫药物皮肤不良反应的相关性。结果：HLA-B*1502基因频率分别为SJS组100%（13/13），MPE组10.5%（2/19），对照组7.1%（1/14）。SJS组分别与MPE组和对照组比较差异具有统计学意义（P<0.05），MPE组与对照组比较差异无统计学意义（P<0.05）。结论：江西汉族人群中芳香族AEDs导致的SJS与HLA-B*1502基因具有强相关性，而MPE与之无相关性。建议江西汉族人群在采用AEDs治疗前应该进行HLA-B*1502基因型检测，阳性者应避免服用芳香族AEDs，此外还需警惕阴性者发生SJS等严重皮肤不良反应。
　　【关键词】 抗癫痫药； 皮肤不良反应； HLA-B*1502； 江西汉族人群
　　抗癫痫药物（AEDs）如卡马西平（CBZ）、奥卡西平（OXC）、拉莫三嗪（LTG）、苯巴比妥（PB）及苯妥英钠（PHT）均可引起皮肤不良反应，包括轻度斑丘疹（MPE）、Stevens-Johnson综合征（SJS）、中毒性表皮坏死松解症（toxic epidermal necrolysis，TEN）及药物超敏综合征（Drug hypersensitivity syndrome，DHS）。其中SJS和TEN是严重的皮肤和黏膜反应，可导致永久性残疾甚至致命，TEN致死率高达40%[1]。
　　目前研究证据最多的引起皮肤不良反应是卡马西平，研究表明，这些严重的皮肤不良反应与HLA基因相关，中国台湾、香港及东南亚国家研究表明CBZ所致SJS与HLA-B*1502基因相关。近年来，中国内陆如广州、武汉等地的亦有研究表明CBZ等芳香族AEDs所致SJS与HLA-B*1502基因有强相关性，目前尚未有人对江西汉族人群做过此项研究。本文拟对46例因服用芳香族AEDs而导致皮肤不良反应的病例作为研究对象，根据皮肤不良反应的轻重分为Stevens-Johnson综合征（SJS）、轻微皮肤反应（MPE）组、对照组（包括耐受者和正常志愿者），采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP-PCR）技术检测HLA-B*1502的基因型，采用Fisher确切概率法检验分析HLA-B*1502与AEDS-cADRs的相关性。以期为临床合理用药提供指导。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料 以笔者所在医院2012年7月-2013年12月神经内科门诊及住院部的因服用芳香族抗癫痫药物而导致皮肤不良反应的46例患者作为研究对象，其中研究组32例，包含SJS 13例，MPE 19例；对照组14例（包括耐受者8例和正常志愿者6例）。对照组为服用抗癫痫药物无不良反应患者和无神经系统疾病、无遗传病家族史的健康体检者。
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 仪器与试剂 美国Omega Bio-Tek公司的全血基因组DNA提取试剂盒，美国BIO-RAD公司的DNA Engine PCR仪、凝胶电泳仪及凝胶成像系统。诊断试剂由北京全式金生物技术有限公司提供，引物由美国Invitrogen生命技术公司提供。
　　1.2.2 步骤 （1）血标本采集及DNA提取；（2）DNA浓度和纯度测定；（3）引物稀释；（4）PCR反应；（5）琼脂糖凝胶电泳；（6）结果判断。
　　1.3 统计学处理 使用SPSS 17.0软件对所得数据进行处理，计数资料采用Fisher确切概率法检验，P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 电泳结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示SJS组HLA-B*1502阳性率达100%（13/13）。MPEHLA-B*1502阳性率为10.5%（2/19）。对照组HLA-B*1502阳性率为7.1%（1/14），详见图1～8。
　　SJS组1～13号、MPE组14～32号、对照组33～46号。C1、C2、S1、S2、S3和S4的目的条带大小分别为796bp、256bp、1331bp、125bp、572bp、373bp。特异性引物S1、S2、S3和S4全部扩增出目的条带者为HLA-B*1502阳性，若有一对或几对引物无目的条带则为阴性）。
　　2.2 各样本组HLA-B*1502基因频率分析 SJS组阳性13例（100%），阴性0例；MPE组阳性2例（10.5%），阴性17例（89.5%）；对照组阳性1例（7.1%），阴性13例（92.9%）。SJS组与MPE组阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；SJS组与对照组阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05）；对照组与MPE组阳性率比较，差异无统计学意义。
　　3 讨论
　　抗癫痫药物是神经内科常用药物，而由此引发的不良反应最常见的为皮肤不良反应，包括轻度斑丘疹（maculopapular eruptions， MPE）以及致命性的皮肤不良反应（（severe cutaneous reactions， SCR）如Stevens-Johnson综合征（SJS）、中毒性表皮坏死松解症（toxic epidermal necrolysis， TEN）及药物超敏综合征（Drug hypersensitivity syndrome， DHS）。SJS和TEN均是严重威胁生命的SCR，病变累及皮肤面积少于10%为SJS，而大于30%为TEN，在10%～30%之间的为SJS与TEN共存[2]。
　　SJS/TEN的发病机制目前还不完全清楚，多数研究认为由免疫反应引起，也有学者。
　　我国内地对此也有相关研究，以广州、武汉等地的研究机构对此研究最多。如广州的秦兵[9]、武汉的孙丹[10]等研究发现以水疱型损伤反应为主要临床表现的SJS/TEN与HLA-B*1502强相关性。
　　本研究将耐受者和正常志愿者均归类于对照组，主要分为三组，即SJS组、MPE组和对照组（包括耐受者和正常志愿者），其HLA-B*1502阳性率分别为100%（13/13）、10.5%（2/19）、7.1%（1/14）。这一结果与以往研究结果一致，提示江西省汉族人群中芳香族AEDs所致SJS/TEN与HLA-B*1502具有强相关性，而AEDs所致MPE与之无相关性。
　　本研究中SJS组13例均出现不同程度的水疱型皮肤黏膜损伤，结果HLA-B*1502阳性率达 到100%，而MPE组均为非水疱型皮肤损伤，HLA-B*1502阳性率仅为10.5%，与对照组无明显差别，这一结果也可从一定程度上证明AEDs所致cADRs与HLA-B*1502的相关性跟皮肤不良反应的临床表型有关，即以水疱型损伤反应为主要临床表现的SJS/TEN与HLA-B*1502强相关性，非水疱型的MPE则与之无相关性[11]。本研究尚缺少DHS病例，因为DHS也是一种比较严重的药疹类型，但临床表型大多以非水疱型皮肤损伤的斑丘疹为主，部分可发展为SJS甚至TEN，所以还需较大样本量研究以进一步证实。
　　然而，以上这些研究结果并不适应于所有地区人群，导致这些现象的原因是不同地区人群中携带HLA-B*1502频率是不一致的[4]，HLA基因系统最重要的特点就是丰富的多态性[12-13]。
　　本研究也提示江西省汉族人群中芳香族AEDs-SJS/TEN与HLA-B*1502强相关，而AEDs-MPE则与之无相关性。本研究建立了一套检测HLA-B*1502基因型的方法，建议在服用CBZ等芳香族AEDs前先检测HLA-B*1502基因型。如果阳性则尽可能避免使用，降低SJS等严重不良反应的发生率；若阴性则可在密切观察下使用。但由于样本量较小，很难代表整个江西省人群的实际情况，需更多大样本的研究，为临床选用AEDs提供更多的依据，有效降低cADRs的发生率，进一步提高临床用药的安全性。
　　参考文献
　　. Epilepsia，2007，65（48）：1015-1018.
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　　[3]陈金波，王宝玺，王宏伟，等.Stevens-Johnson综合征及中毒性表皮坏死松解症61例回顾性分析[J].中华皮肤科杂志，2008，41（8）：542-547.
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　　. Pharmacogenomics，2010，11（3）：349-356.
　　[9]秦兵，民福利，石奕武，等.中国南方汉族人群中卡马西平导致SJS/TEN与HLA-B基因的相关性[J].实用医学杂志，2012，28（13）：2136-2139.
　　.Journal of Huazhong University of Science and Technology：Medical Sciences，2014，34（1）：146-150.